小鼠白介素2(IL-2)ELISA kit，產(chǎn)品編碼：JYM0010Mo

小鼠白介素2(IL-2)ELISA kit，Mouse Interleukin 2 (IL-2) ELISA Kit

【實(shí)驗方法】雙抗體夾心法

【種屬】人

【檢測范圍】 見(jiàn)說(shuō)明書(shū)

【檢測波長(cháng)】450 nm

【樣本類(lèi)型】血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本 

【反應時(shí)間】 1.5~2h

小鼠白介素2（IL-2）酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

本試劑盒僅供科研使用。

本試劑盒用于體外定量檢測小鼠血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中白介素2（IL-2）的含量。

有效期：6個(gè)月

保存條件：2-8℃

實(shí)驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠白介素2（IL-2）水平。用純化的小鼠白介素2（IL-2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白介素2（IL-2），再與HRP標記的白介素2（IL-2）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過(guò)洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素2（IL-2）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度（OD值），通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中小鼠白介素2（IL-2）濃度。

試劑盒組成

樣本處理及要求

1.血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過(guò)程中如出現沉淀，應再次離心。 

2. 血漿：應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應該再次離心。 

3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。 

4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時(shí)，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 100 萬(wàn)/ml 左右。通過(guò)反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。 

5. 組織標本：切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍存備用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。 

6. 標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

7. 不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔 10 孔，在第一、第二孔中分別加標準品 100μl，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液 50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉，再各取 50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液 50μl，混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 50μl，濃度分別為 180pg/ml, 120pg/ml, 60pg/ml, 30pg/ml， 15pg/ml）。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。 

3. 加酶：每孔加入酶標試劑 50ul，空白孔除外。 

4. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。 

5. 配液：將 30(48T 的 20 倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30(48T 的 20 倍)倍稀釋后備用。 

6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。 

7. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50ul，再加入顯色劑 B50ul，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 10 分鐘. 

8. 終止：每孔加終止液 50ul，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

9. 測定：以空白孔調零，450nm 波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液后 15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

注意事項

1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開(kāi)封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。 

2. 濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結果。 

3. 各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在 5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。 

4. 請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn)，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高（樣本 OD值大于標準品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數（×n×5）。 

5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 

6. 底物請避光保存。 

7. 嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準. 

8. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9. 本試劑不同批號組分不得混用。 

10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準。

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線(xiàn)，根據樣品的 OD值由標準曲線(xiàn)查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實(shí)際濃度。

試劑盒性能

1.樣品線(xiàn)性回歸與預期濃度相關(guān)系數 R 值為 0.92 以上。

2.批內與批間應分別小于 9%和 15%.

檢測范圍

3.2pg/ml -200pg/ml

上海牧榮生物科技有限公司

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