傳統流式細胞術(shù)在蛋白質(zhì)互作和低豐度蛋白檢測方面能力受限。我們將流式細胞術(shù)與Duolink®鄰位連接技術(shù)（PLA）結合在一起，實(shí)現了蛋白互作流式分析。Duolink® flowPLA檢測試劑盒通過(guò)增強靈敏度可以檢測細胞群中的低豐度靶蛋白。該實(shí)驗方案易于操作，可適配任意流式細胞儀來(lái)提供可直接發(fā)表的實(shí)驗結果。

Duolink® flowPLA檢測試劑盒可進(jìn)行40次反應，每次需100,000細胞溶于100 µL反應液中。試劑盒組分包含：

1.連接原液(5X) – 稀釋配制1X連接緩沖液

2.連接酶(1 U/μL) – 添加配制連接液

3.擴增原液(5X) – 稀釋配制1X擴增緩沖液

4.聚合酶(10 U/μL) – 添加配制擴增液

5.檢測原液(5X) – 稀釋配制1X檢測緩沖液

Duolink®鄰位連接檢測（PLA）實(shí)現了對內源性蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）和翻譯后修飾的研究，為單一事件提供了可通過(guò)顯微鏡或流式細胞儀進(jìn)行可視化的熒光信號。為了實(shí)現對蛋白質(zhì)間相互作用的研究，Duolink® PLA技術(shù)使用了一對帶有寡核苷酸標記的抗體，當它們相距在40nm以?xún)葧r(shí)，可進(jìn)行滾圈擴增并在添加標記探針后產(chǎn)生特異性熒光信號。

Duolink® PLA可提供四種不同顏色的熒光用于流式細胞儀和顯微鏡檢測，對細胞中多組蛋白質(zhì)間的相互作用實(shí)現可視化。借助Duolink® PLA技術(shù)的放大能力和諸多優(yōu)勢，發(fā)現任何科研突破機會(huì )：

1.可視化蛋白互作——包括穩定和瞬時(shí)兩種

2.可視化翻譯后修飾

3.檢測內源蛋白——無(wú)需表達或遺傳操作

4.高特異性——使用兩種抗體/探針消除假陽(yáng)性

5.無(wú)需特殊設備——可提供基于標準免疫熒光和流式細胞術(shù)的方法