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MCDB 153 培養基
，含微量元素、L-谷氨酰胺和 28mM HEPES 緩沖液，
不含碳酸氫鈉
粉末

產(chǎn)品代碼：HM-AT135


產(chǎn)品描述：

MCDB 培養基是為培養特定細胞類(lèi)型而開(kāi)發(fā)的，無(wú)需血清補充劑。每種 MCDB 培養基都針對特定的細胞類(lèi)型進(jìn)行配制。MCDB 105 和 110 被配制用于人類(lèi)二倍體細胞的快速克隆生長(cháng)正常。MCDB 131 培養基最初是為人類(lèi)微血管內皮細胞 (HMVEC) 的克隆生長(cháng)而開(kāi)發(fā)的。MCDB 151、201 和 302 最初是為人類(lèi)角質(zhì)形成細胞、雞胚成纖維細胞和 CHO 細胞的克隆生長(cháng)而開(kāi)發(fā)的。

AT135 是含有微量元素、L-谷氨酰胺和 28mM HEPES 緩沖液的 MCDB 153。HEPES 是一種兩性離子緩沖液，在 37oC 時(shí)的 pKa 為 7.3，可防止在培養開(kāi)始時(shí)傾向于發(fā)生的初始 pH 升高，并增加培養基的緩沖能力。建議用戶(hù)查閱文獻以獲取有關(guān)針對不同細胞系特定的培養基補充和生理生長(cháng)要求的建議。

方向：

1. 將 17.7gms 懸浮在 900ml 組織培養級水中，持續溫和攪拌直至粉末*溶解。不要加熱水。

2. 在 1 升培養基中加入 1.176 克碳酸氫鈉粉末 (TC230) 或 15.7 毫升 7.5% 碳酸氫鈉溶液 (TCL013)，攪拌至溶解。

3. 使用 1N HCl 或 1N NaOH 將 pH 值調整到低于所需 pH 值的 0.2 - 0.3 pH 單位，因為在過(guò)濾過(guò)程中 pH 值會(huì )升高。

4. 用組織培養級水定容至1000ml。

5. 通過(guò)孔隙率為 0.22 微米或更小的無(wú)菌膜過(guò)濾器過(guò)濾，立即對培養基進(jìn)行消毒，使用正壓而不是真空，以盡量減少二氧化碳的損失。

6. 根據需要在無(wú)菌條件下添加無(wú)菌補充劑，并將所需數量的無(wú)菌培養基分配到無(wú)菌容器中。

7. 將液體培養基儲存在 2-8°C 和避光處直至使用。

需要但未提供的材料：

• 組織培養級水（TCL010）

• 碳酸氫鈉粉（TC230）

• 碳酸氫鈉溶液，7.5% (TCL013)

• 1N 鹽酸 (TCL003)

• 1N 氫氧化鈉 (TCL002)

• 胎牛血清 (RM1112/RM10432)

質(zhì)量控制：

• 外觀(guān)：灰白色至乳白色均勻粉末。

• 溶解度：14.9 gms/L 的澄清溶液。

• 不含碳酸氫鈉的 pH 值：5.10 - 5.70

• 碳酸氫鈉的 pH 值：6.40 - 7.00

• 不含碳酸氫鈉的滲透壓: 300.00 - 340.00

• 碳酸氫鈉滲透壓：320.00 - 360.00

• 培養反應：通過(guò)分析細胞的形態(tài)來(lái)定性評估培養基的生長(cháng)促進(jìn)能力，并通過(guò)估計細胞計數并通過(guò)至少三個(gè)傳代培養將其與對照培養基進(jìn)行比較來(lái)定量評估培養基的生長(cháng)促進(jìn)能力。

• 內毒素含量：NMT 5EU/ml

儲存和保質(zhì)期：

1. 所有粉狀培養基和制備好的液體培養基應儲存在 2-8°C。在有效期內使用。盡管有上述推薦的儲存條件，某些粉末介質(zhì)在某些情況下可能會(huì )出現一些變質(zhì)/降解的跡象。這可以通過(guò)顏色變化、外觀(guān)變化和顆粒物質(zhì)的存在以及溶解后的混濁度來(lái)表示。

2. 不推薦制備濃縮培養基，因為游離堿氨基酸和溶解度低的鹽復合物可能在濃縮培養基中沉淀。

3. 制備培養基的 pH 值和碳酸氫鈉濃度是影響細胞生長(cháng)的關(guān)鍵因素。這也受所用培養基量和培養容器體積（表面積與體積比）的影響。例如，在大瓶中，如 Roux 瓶，隨著(zhù)大量二氧化碳的釋放，pH 值會(huì )明顯升高。因此，必須為每種細胞類(lèi)型確定 pH、碳酸氫鈉濃度、表面積與體積比的最佳條件。我們建議嚴格監測 pH 值。如果需要，可以使用無(wú)菌 1N HCl 或 1N NaOH 或通過(guò)在二氧化碳中鼓泡來(lái)調節 pH 值。

4. 如果需要，可以在過(guò)濾滅菌之前或之后將補充劑添加到培養基中，并遵守無(wú)菌預防措施。培養基的保質(zhì)期取決于添加到培養基中的補充劑的性質(zhì)。

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